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09月14日

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

作者 : admin | 分类 : 生物医学 | 超过 12 人围观 | 已有 0 人发表了看法
原标题:大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

肾脏间质纤维化是慢性肾病(CKD)终末期的典型病理改变,纤维化程度越重,肾脏功能就越差。因此,很多肾病课题组都在积极探索减轻肾间质纤维化的药物。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

中药在这方面的研究相对较多,还有一些课题组希望开发biomaker来评价纤维化的程度。不论如何,深入研究的前提还是制备 肾间质纤维化模型

1.制备原理

尽管手术入路上存在不同,但是制备方法都是采用单侧输尿管结扎造成梗阻,学名Unilateral Uretera Obstruction,即 UUO法

梗阻后,尿液潴留压迫肾小管,导致肾小管上皮细胞进行性坏死,间质急慢性炎细胞浸润,坏死的肾小管组织逐渐被纤维瘢痕取代,最终形成进行性肾间质纤维化。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(肾脏HE染色,图片来自网络)

重要的是在整个病变发生发展过程中, 肾小球改变并不明显。这种病理特征用于评价药物的改善作用是很合适的。

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2.实验动物

首选大鼠,Wistar或SD都可以。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

不推荐使用小鼠。据公认度和各论坛交流经验,即使经验丰富的老手操作,使用小鼠进行UUO法制备模型,死亡率也会很高。同时,小鼠组织太少,如果检测指标较多而动物数又不够,可能会出现组织量不足的情况。

3.手术步骤

(1)大鼠麻醉后仰卧位固定,在左侧腹部中间位置开腹,沿着肾门向下寻找输尿管(像一根白色细线)。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(图中黄色箭头所指为左输尿管)

(2)使用 玻璃分针(可减少额外损伤)游离左侧输尿管,在肾盂开口处和输尿管上1/3的位置分别做永久结扎,然后从两个结扎点中间剪断左侧输尿管。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(3)逐层缝合,关腹。 一定要逐层,先缝肌肉,再缝皮肤,在扎实缝合的前提下尽量缩短线头。如果你偷懒将肌肉和皮肤一起缝合,大鼠苏醒后会咬开线头,到时肠子什么的都漏出来了。

(4)假手术组大鼠开腹后游离输尿管,但是不结扎,直接关腹。

(补一句题外话,最近看秦川老师新冠论文时学到 假手术组的英文翻译方法mock-treated group,大家可以考虑采用)

4.组织病理变化过程

UUO法建立的肾间质纤维化大鼠模型存在一个典型的病理变化:炎症-纤维化。

一般分为术后3-7天、术后14天、术后21天有一些文献中也会采用术后2、5、9、14天来研究。对于常规的信号通路研究(如炎症通路、纤维化通路)来说,选择正确的 时间窗进行干预是很重要的,遗憾地是目前时间窗的选择好像没有统一标准。

术后3-7天,主要病变是肾小管扩张、间质炎细胞浸润、肾小管上皮细胞空泡变,有一些肾小管上皮细胞可能会坏死脱落到管腔中,管型少见。↓

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(肾脏PAS染色,图片来自网络)

术后14天,主要病变是间质炎细胞浸润加重、近端肾小管结构丢失、远端肾小管扩张,可见管型,间质纤维化也出现了(纤维细胞和成纤维细胞同时存在)。↓

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(肾脏HE染色,图片来自网络)

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(肾脏HE染色,图片来自网络)

术后21天,间质炎细胞浸润存在,但不是主要矛盾。主要特征是肾小管结构消失,肾间质纤维化加重。

大鼠肾间质纤维化模型(UUO法)构建方法剖析

(肾脏Masson染色,图片来自网络)

5.病变分析方法

一般而言,UUO法后,采用肾组织HE染色,可通过采用5级法对间质炎症、肾小管扩张、上皮细胞空泡化等病变程度进行 分级评

评价的主要目标“纤维化”,可以采用Masson染色法,标记胶原纤维,然后采用Image Pro Plus对胶原进行 定量分析

分析方法可参考本号既往推文→ 测量实战合集:Image Pro Plus + Image J

Ending

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